敏感的新检测方法可在单个肝细胞和血清中检测乙型肝炎感染
![Hepatitis B virus (HBV) closed circular DNA (cccDNA) detection is of major clinical significance. HBV entry into the nucleus of liver cells (hepatocytes) stimulates cccDNA to create HBV RNAs that give rise to virus offspring. Measurement of cccDNA levels can help clinicians determine the level of HBV infection. Credit: Song-Mei Liu 敏感的新检测方法可在单个肝细胞和血清中检测乙型肝炎感染](https://scx1.b-cdn.net/csz/news/800a/2018/sensitivenew.jpg)
慢性乙型肝炎病毒(HBV)可进展为肝硬化和肝细胞癌(HCC)。一项发表在分子诊断杂志描述了一种新的HBV检测方法,它比目前使用的方法具有优势,因为它有能力检测血清、单细胞和保存的组织样本中的闭环DNA (cccDNA)。该方法可用于早期HCC的诊断,以更有效地管理治疗。
肝癌的发生与HBV密切相关。最近,一些新的靶向cccDNA的抗病毒策略已经建立,以提高HBV的清除。为cccDNA的检测提供一种准确、灵敏的方法具有重要的临床意义。用这种方法,越来越多病人中国武汉大学中南医院基因诊断中心的首席研究员Song-Mei Liu博士解释说:“慢性HBV患者将有预防或延迟HCC发生的精确治疗,肝癌患者可以在早期阶段被诊断。”
新方法采用液滴数字PCR (ddPCR)技术,对检测病毒等微量分子具有较高的灵敏度和准确性。通过结合ddPCR和PCR,研究人员能够在血清、单细胞和福尔马林固定、石蜡包埋的肿瘤中检测到cccDNA。Southern blotting,目前被认为是该目的的金标准,和其他检测方法有重要的局限性,如在检测低拷贝数cccDNA时灵敏度低于ddPCR。其他方法需要通过肝活检获得肝组织。“与肝活检相比,血清可无创获得,广泛用于临床诊断,且具有均匀的cccDNA分布。该试验还提高了cccDNA的检测限度,”刘博士指出。
ddPCR对鉴别哪些患者可能患有肝细胞癌是有用的。研究人员发现,68例HCC患者中近90%为cccdna阳性,而79例非HCC患者中只有53%为cccdna阳性。HCC患者血清cccDNA拷贝数高于非HCC患者。结合血清cccDNA和HBV-DNA分析,区分HCC患者和非HCC患者。“这暗示cccDNA是HCC的一个危险因素,”刘博士说。
研究人员还能够证实血清cccDNA与肝脏样本中检测到的cccDNA水平呈正相关。“血清cccDNA确实是一个比肝内cccDNA更好、更有用的诊断标记,”刘博士说。最近,一些新的靶向cccDNA的抗病毒策略被发现可以提高HBV的清除。因此,提供一种准确、灵敏的cccDNA检测方法,对于HCC的早期诊断和预测、靶向治疗以及评价治疗效果具有重要的临床意义。
在一篇评论加拿大埃德蒙顿阿尔伯塔大学检验医学与病理学系的樊申博士观察到,“定量的血清cccDNA和HBV-DNA是区分HCC患者和非HCC患者的有效方法,其敏感性为74.5%,特异性为93.7%。这是一个重要的发现,可以引导HCC的早期诊断,并以非侵入性的方式更准确地预测慢性HBV进展。”
根据世界卫生组织的数据,全球有2.57亿人感染乙肝病毒,2015年乙肝病毒导致88.7万人死亡,主要是由于肝脏并发症。慢性HBV感染可以用替诺福韦或恩替卡韦等药物治疗。2015年,只有9%的乙肝病毒感染者意识到自己被感染了。
进一步探索
范申等。乙型肝炎病毒共价闭合环状dna选择液滴数字PCR,分子诊断杂志(2018)。DOI: 10.1016 / j.jmoldx.2018.03.001