nmd抑制ASOs的鉴定及其特异性评估。gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba NMD记者示意图。数据显示gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba 外显子在NMD记者。红色星号(*)表示W1282X突变的位置。gydF4y2BabgydF4y2Ba ASO筛查示意图。我们设计了19个moe - ps修饰的15-mer ASOs(黄色和洋红色条)，以1 nt分辨率覆盖外显子24、25和26上推测的EJC结合位点。稳定表达每个NMD报告基因的U2OS细胞转染靶向EJC结合区域的单个ASOsgydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba 外显子(gydF4y2BacgydF4y2Ba 24、(gydF4y2BadgydF4y2Ba ) 25，或(gydF4y2BaegydF4y2Ba ) 26，分别。使用补充表5中所列引物(目标外显子上方红色条)，用放射性RT-PCR检测报告基因mRNA水平。gydF4y2BafgydF4y2Ba 环己亚胺对gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba 在16HBE-W1282X和DLD1-W1282X细胞中表达。gydF4y2BaggydF4y2Ba 15-mer ASO鸡尾酒LC15-1对gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba 16HBE-W1282X细胞的表达。gydF4y2BahgydF4y2Ba LC15-1与LC18对gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba 16HBE-W1282X细胞的表达。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba 环己亚胺对gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba 在DLD1-WT、16HBE-G551D和16HBE-F508del细胞中的表达。gydF4y2BajgydF4y2Ba
雌性生殖道gydF4y2Ba 以名义总浓度为120 nM的Sc15或LC15-1转染DLD1-WT、16HBE-G551D和16HBE-F508del的mRNA水平。gydF4y2BakgydF4y2Ba 经环己亚胺、120 nM Sc15或LC15-1处理的16HBE-W1282X细胞内源性nmd敏感mRNA水平所有mRNA水平(gydF4y2BafgydF4y2Ba ) - (gydF4y2BakgydF4y2Ba ) RT-qPCR检测;gydF4y2Ba雌性生殖道gydF4y2Ba 分别使用靶向外显子22和外显子23的正向引物和反向引物检测mRNA水平。gydF4y2BaRPL32gydF4y2Ba 作为除。以外所有小组的内部参考资料gydF4y2BahgydF4y2Ba ，其中gydF4y2Ba产生HPRTgydF4y2Ba 担任内部参考。NT =不治疗;阿Dox:强力霉素1 μg/mL;Sc15/18 = 15/18 mer Scramble ASO;CC15 = ASO鸡尾酒C488/C507/C526;LC15-1=ASO鸡尾酒C478/C495/C515;LC18 = 18 mer ASO鸡尾酒C24/25/26;CHX = 100 μg/mL环己亚胺孵育1 h。数据以平均值±标准差表示。所有数据点代表独立的生物重复。gydF4y2BacgydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2BaegydF4y2Ba （gydF4y2BangydF4y2Ba = 1)。gydF4y2BafgydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2BakgydF4y2Ba （gydF4y2BangydF4y2Ba = 3的所有处理，除了gydF4y2BangydF4y2Ba = 2在lc18 mer 120 nM ingydF4y2BahgydF4y2Ba )．对于所有统计检验，n.s.。gydF4y2BaPgydF4y2Ba > 0.05， *gydF4y2BaPgydF4y2Ba < 0.05， **gydF4y2BaPgydF4y2Ba < 0.01， ***gydF4y2BaPgydF4y2Ba < 0.001。gydF4y2BafgydF4y2Ba ，gydF4y2BahgydF4y2Ba (LC15-1 vs LC18)，gydF4y2Ba我gydF4y2Ba ，gydF4y2BakgydF4y2Ba 双尾学生的gydF4y2BatgydF4y2Ba 以及。gydF4y2BaggydF4y2Ba ，gydF4y2BahgydF4y2Ba 与Sc15相比，Dunnett后验单因素方差分析。gydF4y2BajgydF4y2Ba 单向方差分析。信贷:gydF4y2Ba自然通讯gydF4y2Ba (2022)。DOI: 10.1038 / s41467 - 022 - 30668 - ygydF4y2Ba
反义寡核苷酸(ASOs)是一种可以用来控制细胞中蛋白质水平的分子。冷泉港实验室教授Adrian Krainer利用ASO技术开发了首个fda批准的脊髓性肌萎缩症治疗方法Spinraza。这种药物已经帮助超过11000名患者制造更多脊椎中某些神经元所需的蛋白质。gydF4y2Ba
从那时起，Krainer一直在寻找ASOs帮助治疗其他疾病的更多方法。他已把注意力集中在gydF4y2Ba囊性纤维化gydF4y2Ba (CF)，患者无法产生足够的CFTR蛋白质。他的团队发现了如何使用aso来制造更多不完美但仍然有效的CFTR版本。这一发现为一种新的治疗方法奠定了基础，可能有助于减轻CF症状，提高患者的生活质量。gydF4y2Ba
不完美的CFTR蛋白是基因突变的结果。它导致细胞接受错误的指令来制造蛋白质。错误的指令被消除，蛋白质也不会被制造出来，因为一般来说，不完美的蛋白质可能是破坏性的。Krainer的ASOs诱骗细胞遵循错误的指令，制造出不完美的CFTR蛋白。他的团队发现，在CF病例中，拥有不完美版本的蛋白质比完全没有要好。他们的方法改善了肺的功能gydF4y2Ba细胞gydF4y2Ba 表明ASO策略可以改善具有该突变的CF患者的症状。gydF4y2Ba
发表在gydF4y2Ba自然通讯gydF4y2Ba 该团队的发现强调了ASOs可用于治疗疾病的新方法。这项研究由前医学博士金永真(Young Jin Kim，音)领导。Krainer实验室的学生。Krainer希望继续扩大ASO技术在治疗方面的潜力。他认为，在未来，aso可能会越来越多地成为一种针对个人独特基因突变量身定制治疗的方法。“如果更多这种类型的gydF4y2Ba药物gydF4y2Ba Krainer说，“如果在不久的将来，ASOs成为制造个性化药物的常规方式，我也不会感到惊讶。”gydF4y2Ba
更多信息:gydF4y2Ba Young Jin Kim等，基因特异性无意义介导mRNA衰变靶向治疗囊性纤维化，gydF4y2Ba
自然通讯gydF4y2Ba (2022)。gydF4y2Ba
DOI: 10.1038 / s41467 - 022 - 30668 - ygydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba :囊性纤维化的一种新的治疗方法(2022,7月14日)检索到2022年7月27日从//www.puressens.com/news/2022-07-treatment-approach-cystic-fibrosis.htmlgydF4y2Ba
这份文件受版权保护。除为私人学习或研究目的而进行的公平交易外，未经书面许可，不得转载任何部分。内容仅供参考之用。gydF4y2Ba
